掌握鼠尾膠原蛋白制備方法是保障實驗可重復性與生物學功能的關鍵

更新時間：2025-12-02

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　　鼠尾膠原蛋白是從大鼠尾腱中提取的高純度天然膠原，因其結構完整、生物相容性優異，被廣泛應用于3D細胞培養、組織工程支架、傷口修復模型及藥物遞送系統等前沿研究。其制備過程對溫度、pH、離子強度及操作潔凈度敏感，稍有偏差即導致變性、降解或凝膠性能異常。掌握鼠尾膠原蛋白標準化、無菌化的制備方法，是保障實驗可重復性與生物學功能的關鍵。

　　一、材料與前期準備

　　實驗動物：選用健康成年SD或Wistar大鼠（6–12周齡），尾部無損傷；

　　試劑：0.1%醋酸溶液（用超純水配制，4℃預冷）、PBS緩沖液、75%乙醇；

　　器具：無菌手術剪/鑷、玻璃勻漿器、離心管、磁力攪拌器、低溫離心機（4℃）、0.22μm濾器；

　　環境：全程在超凈工作臺內操作，所有器具經高溫高壓滅菌。

　　二、尾腱分離與清洗

　　處死大鼠后迅速取下整條尾巴，浸入75%乙醇消毒30秒；

　　在冰上剝離皮膚，逐節剪斷尾椎骨，小心分離白色尾腱束；

　　將尾腱置于預冷PBS中反復漂洗，去除血跡與脂肪組織。

　　三、酸溶提取（關鍵步驟）

　　將洗凈的尾腱剪碎（約1–2mm段），按1g組織:50mL比例加入0.1%冰醋酸溶液；

　　4℃磁力攪拌24–48小時（避光），使膠原充分溶出；

　　注意：全程保持低溫，防止酶解或熱變性；避免劇烈震蕩產生氣泡導致蛋白氧化。

　　四、離心與過濾純化

　　4℃下以10,000–12,000×g離心30分鐘，棄沉淀；

　　上清液經0.22μm濾膜過濾除菌，得澄清淡黃色膠原溶液；

　　可分裝于無菌EP管，–20℃或–80℃保存（避免反復凍融）。

　　五、濃度測定與質量驗證

　　羥脯氨酸法或BCA法測定蛋白濃度（通常為1–3mg/mL）；

　　SDS-PAGE電泳驗證α1、α2鏈完整性（典型條帶約130kDa和120kDa）；

　　凝膠形成測試：將膠原液調至中性（加10×PBS和NaOH），37℃孵育30分鐘，應形成均勻凝膠。